逸漠生物iPSC诱导肺类器官产品

Advanced-diff系列肺类器官试剂盒是专用于诱导人多能干细胞分化为肺类器官的培养试剂盒，包含了适合Advanced-diff系列肺类器官生长的基础培养基、成熟培养基及诱导细胞分化所需的添加物，即买即用，不含动物源成分，具体产品信息如下。

产品相关信息

01产品优势

无动物源成分，操作简单，使用方便，诱导的肺类器官能产生类似肺泡的细胞结构，在29天左右可观察到类似气道细胞、肺泡细胞生成。

02操作流程

①分化第0天

当人多能干细胞汇合度达到75%-85%左右开始诱导分化为肺类器官，分化第0天使用基础培养基1诱导DE形成。分化第1天吸去培养基，加入1.97 mL基础培养基1+10 μL补充剂A+20μL补充剂B。在第2天和第3天，吸去培养基，加入1.98 mL基础培养基1+20 μL补充剂B，开始分化为内胚层细胞。

②分化第4天

吸弃培养基，加入2 mL/孔基础培养基2在37℃CO2，5%培养箱中培养,每24h更换一次培养基，连续培养3天。

③分化第7天

基础培养基3+80 μL补充剂C配成LPC诱导培养基混合均匀，仔细抽吸上清液，不干扰细胞，用1 mL恢复室温的LPC诱导培养基(含10μM Y-27632)重悬细胞，轻轻地上下移液以确保单细胞溶液均匀。使用自动细胞计数器计数细胞，使用台盼蓝排除死亡细胞，将密度为2.0 x105个细胞/mL的细胞接种到提前制备 的12孔基质胶包被的板上，在12孔板中每孔培养基最终体积为1 mL。第二天，更换为不含Y-27632的LPC诱导培养基。每隔一天更换培养基，持续11天。

④分化第18天

第18天，14.965 mL基础培养基4+35 μL补充剂D配制成3D类器官诱导培养基。仔细抽吸上清液，不干扰细胞，用1 mL 3D类器官诱导培养基重悬细胞，轻轻地上下移液以确保单细胞溶液均匀。使用自动细胞计数器计数细胞，使用台盼蓝排除死亡细胞。将冷的基质胶与细胞混合，接种到24孔板上每孔加入700 μL 3D类器官诱导培养基，并每隔一天更换培养基，持续6天。

⑤分化第23天

在第23天，14.96 mL基础培养基5+40 μL补充剂E配制成3D类器官分化培养基，将孔里的培养基更换为700 μL恢复室温的3D类器官分化培养基，每隔一天更换培养基，持续6天。

⑥分化第29天

第29天，199.48 mL基础培养基6+520 μL补充剂F配制成3D类器官成熟培养基，将孔里的培养基更换为700 μL恢复室温的3D类器官成熟培养基，每隔一天更换培养基，进行长期培养。

鉴定